UVA誘発性ROS形成研究：ジェントルセラム

1.0目的

MatTek EpiDerm 組織モデルを使用して、Aeonia Gentle Serum が UVA 誘発性の ROS 形成から保護する能力を評価します。

2.0テストの概要

この研究に使用された試験モデルは、MatTek EpiDerm でした。この皮膚モデルは、培養されて多層構造の高度に分化したヒト表皮モデルを形成した正常なヒト由来表皮ケラチノサイトで構成されています。超微細構造分析により、ケラトヒアリン顆粒、トノフィラメント束、デスモソーム、および生体表皮に特徴的なパターンで配列された細胞間ラメラ脂質層を含む多層角質層の存在が明らかになりました。プロフィラグリン、K1/K10 サイトケラチンペア、インボルクリン、およびタイプ I 表皮トランスグルタミナーゼなどの成熟表皮特有の分化マーカーがこのモデルに局在しています。MatTek EpiDerm は有糸分裂および代謝活性も持っています。

この研究では、MatTek EpiDerm 組織に ROS 感受性染料 CM-H2DCFDA を局所的に塗布しました。ROS が形成されると、この染料と反応して蛍光最終生成物が生成され、蛍光の強度は ROS 形成の程度に比例します。組織に染料を塗布した後、テスト材料で局所的に処理し、UVA 照射にさらしました。照射中のさまざまな時点で、組織の蛍光を測定し、UVA 光照射による ROS 形成の指標として使用しました。テスト材料で処理した組織の蛍光強度が、UVA 光にさらした未処理の組織で測定された強度よりも低かった場合、テスト材料は UVA 光 ROS 形成から保護すると判断されました。

3.0メソッド

3.1組織の準備

到着後、MatTek EpiDerm 組織は、使用するまで 4°C で保管されました。使用前に、使用する組織をアガロース輸送トレイから取り出し、0.9 ml のヒドロコルチゾンを含まないアッセイ培地 (37±2°C) を含む 6 ウェルプレートに配置しました。組織は、37±2°C、5±1% CO2 で 1 時間インキュベートされました。このインキュベーション期間後、PBS で調製した 5 μM CM-H2DCFDA (ROS 感受性染料) 100 μl を組織に局所的に塗布し、組織をさらに 1 時間インキュベートしました。インキュベーション期間の終了時に、組織を 300 μl の PBS で 3 回すすぎ、300 μl の PBS を含む 24 ウェルプレートに移しました。

3.2試験材料の適用

細胞を UVA 光にさらす前に、6 μl の試験物質を組織に局所的に塗布し、細胞スクレーパーを使用して組織全体に均一に広げました。UVA にさらしていない組織と未処理の組織は PBS で局所的に処理し、陽性対照組織は 150 μg/ml の Trolox を添加した PBS で処理しました。試験物質を塗布した後、励起波長 485 nm、発光波長 518 nm を使用して組織の表面のベースライン蛍光測定を行いました。

3.3 UVAへの曝露

表皮組織は、強度 2 mW/cm2 で 365 nm の光を発する XX-20BLB UV ベンチランプを使用して、室温で UVA 光に照射されました。UVA に照射されなかった組織も、光から保護された室温で保管されました。蛍光の変化は、15、30、45 分後に測定されました (UVA 線量はそれぞれ 1.8、3.6、5.4 J/cm2)。

3.4計算

各測定ごとに組織の表面全体で 9 回の蛍光測定が行われ、これらの 9 回の測定の平均が各組織の ROS 形成の指標として使用されました。次に、各組織のベースライン蛍光を 15 分および 30 分の値から差し引いて、UVA 曝露による ROS 形成の変化を計算しました。次に、各時点での各処理の平均蛍光値 (RFU) を決定しました。次に、各時点内の処理を ANOVA を使用して比較しました。

4.0結果

ROS アッセイの結果を表とグラフ 1 に示します。この研究では、1 つの処理に関連する ROS 形成が他の処理よりも有意に大きかったため、その結果をグラフ 1b に示します。すべての値は相対蛍光単位 (RFU) で表されます。値は平均 ± 標準偏差 (処理あたり n=3) として表されます。(*) は、未処理組織と有意に異なる値を示します (p<0.05)。

5.0議論

この研究では、MatTek EpiDerm 組織を UVA 光にさらすと、ROS 形成が大幅に増加しました。Aeonia Gentle Serum で処理した組織では、ROS 形成の増加が防止され、3 つの時点すべてで ROS の減少が観察されました。

表1. UVA ROS形成結果

グラフ1. UVA ROS形成結果

免責事項：この文書は、独立した第三者試験施設によって実施されたデラヴィーサイエンスバチルスライセート研究の要約です。ここで提供される情報は正しいと考えていますが、過去の実績は必ずしも将来の結果を示すものではありません。